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昆山禾创论述丹参中丹参酮提取工艺优化及活性研究

[导读]本实验采用超临界CO2提取法对丹参中丹参酮的提取工艺进行优化,得到丹参酮纯物质。研究各丹参酮对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑菌效果,昆山禾创超声仪器有限公司筛选出抑菌效果最佳的丹参酮;对比丹参酮纯品以及丹参酮IIA-P188固体分散体的水溶性;通过流式细胞仪检测,探究丹参酮IIA-P188固体分散体的抗癌活性。

实验材料药材丹参,丹参酮ⅡA对照品由中国药品生物检定所提供;甲醇为色谱纯(美国Fisher公司)。水为重蒸去离子水。其余试剂均为分析纯;高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);高效液相色谱仪;KH7200DB型超声波清洗器(昆山舒美超声仪器有限公司)。

超临界CO2流体萃取仪、高效液相色谱质谱联用仪、旋转蒸发仪、台式高速冷冻离心机TGL-20M (角转子12×1.5 m L) 、电子分析天平、全自动恒温水浴锅、超净工作台、抽真空电热干燥箱、高速中药粉碎机、扫描电子显微镜、KH-200KDE双频数控超声波清洗机、电子万用炉、微型循环水真空泵、倒置荧光显微镜。

精确称取丹参干样10 g, 经粉碎机充分粉碎后过40目筛, 将丹参粉末倒入萃取釜中, 以温度、压力、萃取时间和夹带剂流量为变量, 依次改变一种变量, 固定其他3种变量, 研究不同温度 (30、35、40、45和50℃) , 压力 (20、25、30、35和40 MPa) , 萃取时间 (1、1.5、2、2.5和3 h) 和夹带剂流量 (0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mL·min-1) 对丹参提取率的影响。打开低温水浴锅, 待温度降至5℃时, 依次打开夹带剂供应开关, 设置夹带剂流速, 打入夹带剂;打开萃取仪主机开关, 设定目的温度数值和压力数值, 打开CO2钢瓶阀门和空气压缩机, 开始加压, 待达到目的温度与目的压力时, 打开出口阀, 微量调节阀调节气流流速, 待CO2流速稳定后, 收集管收集药液, 旋转蒸发至干, 留下固体部分, 电子分析天平称重并计数提取率。提取率 (%) η= (m1×n) /m2;m1:丹参提取物质量 (g) ;m2:所萃取的丹参药材质量 (g) ;n:提取物中相应成分质量分数 (%) 。

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